细粒棘球蚴重组蛋白FGFR1的原核表达及多克隆抗体制备

来源：中国畜牧兽医杂志2026年第7期北京时间：

作者：马玉惠, 陈惠琴, 李金新, 黄雨杰, 滕亮, 陈蓓

单位：1.新疆医科大学药学院，乌鲁木齐 8300542.新疆医科大学第一附属医院药学部，乌鲁木齐 8300543.省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室，乌鲁木齐 830054

摘要：目的 利用原核系统表达并纯化细粒棘球蚴成纤维细胞生长因子受体1蛋白（Echinococcus granulosus FGFR1，EgFGFR1），制备多克隆抗体并定位其在细粒棘球绦虫原头蚴及囊泡中的表达与分布，为阐明EgFGFR1的生物学功能、探索基于该蛋白的免疫诊断方法与靶向治疗策略奠定基础。 方法 构建pET30a-EgFGFR1重组质粒并转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，优化IPTG的浓度、诱导温度和时间，诱导重组蛋白的表达；利用SDS-PAGE分析蛋白可溶性；采用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白，通过Western blotting鉴定后制备多克隆抗体，分别用ELISA和Western blotting检测抗体效价及特异性，通过免疫荧光试验检测EgFGFR1在原头蚴和囊泡中的表达及定位。 结果 成功构建pET30a-EgFGFR1重组质粒，EgFGFR1重组蛋白在0.1 mmol/L IPTG、30 ℃ 诱导5 h的条件下表达效果最佳，表观分子质量约为73 ku，以包涵体为主要表达形式，经250 mmol/L咪唑洗脱可获取大量纯化蛋白；Western blotting检测结果显示， 重组蛋白条带与预期大小一致。ELISA检测EgFGFR1多克隆抗体效价为1∶102 400；Western blotting检测结果显示，所制备的抗体可特异性识别EgFGFR1蛋白；免疫荧光检测结果显示，EgFGFR1在原头蚴及囊泡中均有表达。 结论 成功构建pET30a-EgFGFR1重组质粒，通过原核表达系统获得EgFGFR1重组蛋白，筛选出最佳诱导表达条件，实现了目的蛋白的高效纯化，并制备了具有较高特异性和免疫原性的多克隆抗体，同时检测到EgFGFR1表达于细粒棘球绦虫的原头蚴和囊泡等阶段，为后续探究EgFGFR1的生物学功能提供了试验基础。

关键词：细粒棘球蚴;细粒棘球蚴成纤维细胞生长因子受体1蛋白（EgFGFR1）;原核表达;多克隆抗体

基金资助：国家自然科学基金项目(82260722);“天山英才”医药卫生高层次人才项目(TSYC202401B020);新疆维吾尔自治区自然科学基金(2023D01D16);省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室开放课题资助项目(SKL-HIDCA-2023-YX5)