波尔山羊FGF1基因克隆、序列分析及对HEK293T细胞增殖和迁移的影响

来源：中国畜牧兽医杂志2026年第7期北京时间：

作者：张彩红, 刘文晴, 王唯, 范维, 孙福亮

单位：1.延边大学农学院，延吉 1330022.延边大学实验动物中心，延吉 133002

摘要：目的 克隆波尔山羊成纤维细胞生长因子1（fibroblast growth factor 1，FGF1）基因编码区序列（CDS）并进行生物信息学分析，探究FGF1基因在波尔山羊干奶期与泌乳期组织表达规律及对HEK293T细胞增殖、迁移的影响，为波尔山羊创面修复技术开发提供依据。 方法 以干奶期波尔山羊心脏组织cDNA为模板，克隆FGF1基因CDS区并构建过表达质粒，利用MegAlign和Mega 11.0软件对克隆获得的波尔山羊FGF1基因核苷酸序列进行相似性比对和系统进化树构建，并结合在线软件分析FGF1蛋白生物信息学特征；利用实时荧光定量PCR检测FGF1基因在波尔山羊干奶期与泌乳期各组织中的表达量；将构建的过表达质粒转染HEK293T细胞后，使用激光共聚焦显微镜观察FGF1蛋白亚细胞定位；采用CCK-8试剂盒检测过表达FGF1对HEK293T细胞增殖能力的影响；通过划痕试验和Transwell小室迁移试验评估过表达FGF1对HEK293T细胞迁移能力的影响；利用Western blotting检测过表达FGF1的HEK293T细胞中细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK）和蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）磷酸化水平。 结果 波尔山羊FGF1基因CDS区全长468 bp，编码155个氨基酸。该基因核苷酸序列与绵羊的相似性最高（99.6%），在不同物种中具有高度保守性。生物信息学分析发现，波尔山羊FGF1蛋白为无信号肽、非跨膜的稳定亲水性蛋白，包含15个潜在磷酸化位点和2个O-糖基化位点。FGF1蛋白二级结构以无规则卷曲（63.23%）和延伸链（25.16%）为主，三级结构与二级结构预测结果一致，与FGFR1、FGFR2、FLT1、S100A13等蛋白存在互作。组织表达检测显示，FGF1基因在波尔山羊干奶期、泌乳期各组织中广泛表达，不同生理时期在心脏中表达量均最高；与泌乳期相比，干奶期波尔山羊肝脏、乳腺、脂肪、脾脏、肾脏、肌肉中FGF1基因表达量显著升高（P<0.05），肺脏中FGF1基因表达量显著降低（P<0.05）。FGF1蛋白主要定位于HEK293T细胞的细胞核。与对照组相比，过表达FGF1的HEK293T细胞增殖能力和细胞迁移能力显著增强（P<0.05），且ERK和AKT磷酸化水平显著升高（P<0.05）。 结论 本研究成功克隆波尔山羊FGF1基因，明确了其序列特征及在不同时期组织表达规律；过表达FGF1可通过激活ERK和AKT促进HEK293T细胞增殖与迁移。本研究结果为进一步解析FGF1基因在波尔山羊组织稳态及修复中的作用提供了依据。

关键词：波尔山羊;FGF1基因')">FGF1基因;克隆;细胞增殖;细胞迁移

基金资助：吉林省肉用自主培育良种高效利用与无抗养殖(202504)