呕吐毒素诱导猪小肠上皮细胞前后m6A转录图谱分析

来源：中国畜牧兽医杂志2026年第7期北京时间：

作者：金淑婷, 李美琪, 李红蕾, 包文斌, 吴正常, 范海瑞

单位：扬州大学动物科学与技术学院，扬州 225009

摘要：目的 探究呕吐毒素（deoxynivalenol， DON）在诱导猪肠道损伤过程中的潜在分子调控机制。 方法 以猪小肠上皮细胞系（IPEC-J2）作为试验载体，采用梯度浓度（0、300、500、1 000、1 500和2 000 ng/mL）DON处理细胞，通过检测细胞形态学变化及关键基因表达，构建DON诱导的体外细胞损伤模型。运用6-甲基腺嘌呤（m6A）甲基化RNA免疫共沉淀测序（m6A-MeRIP-Seq）技术绘制DON处理前后IPEC-J2细胞的m6A修饰谱，并通过生物信息学分析挖掘关键调控基因及相关信号转导通路。 结果 试验确定了最佳作用条件为1 000 ng/mL DON诱导48 h，成功建立了DON诱导IPEC-J2细胞模型。与空白对照组相比，DON组中IPEC-J2细胞骨架蛋白α-Tubulin分布明显减少，同时细胞凋亡水平、活性氧（ROS）水平以及细胞因子白细胞介素-6（IL-6）、IL-1β、IL-12基因表达量均显著升高（P<0.05），过氧化氢酶（CAT）、铜锌超氧化物歧化酶（CuZn-SOD）、锰超氧化物歧化酶（Mn-SOD）等抗氧化相关基因表达量均显著降低（P<0.05）。图谱分析显示，空白对照和DON组中共存在10 473个m6A峰和5 649个m6A修饰基因，序列分析鉴定出1个经典的GGACU共有序列基序，修饰位点分布显示多数基因呈现单一m6A富集峰，且甲基化修饰主要定位于基因的起始密码子、开放阅读框及终止密码子区域。两组中共筛选出3 871个显著差异的m6A峰，结合Input组中mRNA转录本联合分析显示，共鉴定出742个差异表达基因。蛋白质互作（PPI）网络显示，肿瘤坏死因子受体相关因子2（TRAF2）处于位于网络的核心枢纽位置；KEGG通路富集分析显示，差异表达基因主要参与TNF-α、NF-κB、MAPK等炎症相关信号通路。实时荧光定量PCR检测显示，DON组IPEC-J2细胞中TRAF2基因表达量极显著高于空白对照组（P<0.01）。 结论 本研究成功构建了DON处理前后IPEC-J2细胞的m6A修饰全景图谱，并初步确定TRAF2为DON诱导损伤的关键效应分子，为深入阐释IPEC-J2细胞抗DON损伤的分子防御机制及表观遗传调控策略奠定了理论基础。

关键词：呕吐毒素;猪小肠上皮细胞;6A图谱')">m6A图谱

基金资助：2025省级大学生创新训练计划项目(S202511117106);江苏省自然科学基金青年基金项目(BK20250889)