基于C6流式细胞仪平台应用FRET技术在活细胞中研究蛋白质相互作用

来源：中国生物工程杂志2017年第5期北京时间：

作者：孟坤, 何庆瑜, 王通, 卢少华

单位：暨南大学生命科学技术学院 功能蛋白质研究广东省普通高校重点实验室 广州 510632

摘要：荧光共振能量转移（fluorescence resonance energy transfer，FRET）显微镜技术被广泛应用于在活细胞中研究蛋白质相互作用。随着流式细胞术（fluorescence activated cell sorting，FACS）的发展与应用，FACS-FRET技术不但可以检测活细胞中蛋白质相互作用，还可以进行定量统计分析。由于流式细胞仪价格昂贵、FRET技术对荧光基团发光光谱的特殊要求等原因，目前为止FACS-FRET技术仅仅被应用到一些特殊的科学研究。为了解决这些问题，构建了一对新的FRET荧光基团EGFP-mCherry，并且在小型流式细胞仪C6上检测了EGFP-mCherry融合蛋白的FRET信号，最后使用已明确有相互作用关系的p53蛋白和MDM2蛋白做验证，证明了所构建的EGFP-mCherry可以作为检测FRET信号的荧光基团。不仅促进了FACS-FRET技术的发展，还为人类疾病治疗的药物作用靶点研究提供了有利的研究手段。

关键词：荧光共振能量转移,流式细胞术,活细胞,蛋白质相互作用

基金资助：国家自然科学基金面上资助项目（31570828）