7肽和12肽两种M13噬菌体展示库筛选肿瘤坏死因子alpha拮抗肽的比较

来源：中国生物工程杂志2017年第5期北京时间：

作者：胡昌武, 谢君, 朱乃硕

单位：复旦大学生命科学学院 遗传工程国家重点实验室 微生物与分子免疫学实验室 上海 200438

摘要：肿瘤坏死因子alpha的拮抗剂是治疗多种炎症性自身免疫疾病的首选，但抗体类拮抗物因副作用明显而使用受限，尤其是机体内抗抗体的产生，严重影响治疗效果和药物代谢。而肽类物除免疫原性低之外，和小分子相比也有更低的毒性和更强的靶标特异性。使用7肽和12肽两种M13噬菌体展示库筛选TNFα拮抗肽，以分析7肽和12肽分别作为TNFα拮抗肽的亲和性与功能性。经过3~4轮的筛选和验证，得到2条7肽序列和2条12肽序列。利用ELISA方法检测合成肽与TNFα结合的亲和性，编号632的7肽亲和性最强，Kd=138nmol/L；编号636的12肽亲和性稍差，Kd=8.59μmol/L。Insight Ⅱ软件分别分析632肽和636肽与TNFα二聚体结合，发现632肽与TNFα二聚体结合更加稳定，并且在细胞水平上632肽拮抗TNFα活性功能比636肽更强，有632肽存在的条件下TNFα诱导的L929细胞生存率上升了3倍，而636肽的作用只有2倍。7肽比12肽更适合作为TNFα拮抗肽。

关键词：噬菌体展示库,肿瘤坏死因子,拮抗肽

基金资助：国家自然科学基金（30901315,30970144）、国家“863”计划重大课题（2011AA02A114）、上海市科委支撑项目（13431900602）资助项目