乙肝核心抗原病毒样颗粒呈现HPV 16L1抗原表位及特异抗体诱导

来源：中国生物工程杂志2017年第3期北京时间：

作者：孙文佳, 姚宇峰, 杨旭, 黄惟巍, 刘存宝, 龙琼, 褚晓杰, 马雁冰

单位：中国医学科学院/北京协和医学院 医学生物学研究所 昆明 650118

摘要：目的：构建呈现HPV 16L1抗原表位的病毒样颗粒（VLPs），为新型HPV疫苗及特异抗体制备提供新的思路。方法：将编码HPV 16L1抗原表位QPLGVGISGHPLLNKLDDTE寡聚核苷酸片段克隆于HBcAg基因编码第78、79位氨基酸序列之间，重组质粒转化大肠杆菌DH5α。重组蛋白经IPTG诱导后以SDS-PAGE分析表达情况，并以Western blot鉴定重组蛋白中HPV 16L1表位的免疫反应性。菌体超声破碎后经硫酸铵盐析法和蔗糖密度梯度离心进行纯化，并经凝胶层析Sepharose G25脱盐，最后以电子显微镜及高效液相（HPLC）凝胶过滤色谱鉴定VLPs的存在并分析纯度。纯化的病毒样颗粒分别于0周、2周、4周经皮下注射免疫BALB/c小鼠，以Western blot分析血清特异识别L1蛋白的能力。结果：HBcAg/L1肽嵌合蛋白获得成功表达，能够被商业化L1抗体特异识别，经密度梯度超速离心及HPLC分析显示其与HBcAg行为一致，电子显微镜观察进一步确定其以HBcAg病毒样颗粒形式存在。VLPs免疫小鼠获得的抗血清能够特异识别酵母表达的重组L1蛋白。结论：HBcAg VLPs成功呈现HPV16L1蛋白并有效激发特异抗体应答。

关键词：人乳头瘤病毒,表位,乙肝核心抗原,病毒样颗粒,原核表达

基金资助：云南省对外科技合作计划项目（2013IA005），云南省应用基础研究计划重点项目（2016FA049），云南省应用基础研究面上项目（2013FZ137、2010ZC232）资助项目