Nodal检测双单抗夹心ELISA法建立及应用

来源：中国生物工程杂志2017年第3期北京时间：

作者：吴孟玲, 周嘉旺, 杜军

单位：中山大学药学院 微生物与生化药学实验室 广州 510006

摘要：现已证实，Nodal参与了肿瘤恶性生物学过程，但对其高敏感检测法尚未建立。采用基因工程表达人源Nodal作为抗原免疫BALB/c小鼠，通过经典PEG诱导的细胞融合技术筛选出针对Nodal的特异性单克隆抗体7株。夹心ELISA确证7株抗体组成了15种可配对的抗体对。经筛选后选取抗体对AF12-DG5建立标准化夹心ELISA法，结合生物素-亲和素检测系统，DG5抗体标记生物素，采用链亲和素与辣根过氧化物酶标记的生物素（HRP-Biotin）按质量比4：1预先混合孵育的ABC混合物进行检测，以提高ELISA法的灵敏度。棋盘滴定确定抗体工作最佳浓度为：捕获抗体（AF12）2μg/ml，检测抗体（生物素化DG5）2μg/ml。此条件下的夹心ELISA法线性范围为0~3 000pg/ml，检测限为68pg/ml，平均回收率为99.6%，精密度准确度良好。以正常人血清作为阴性对照，使用该夹心ELISA法测定结直肠癌、鼻咽癌和胆囊癌患者血清，发现三种肿瘤患者血清与正常人血清中的Nodal浓度均存在明显的统计学差异，可作为临床使用参考。

关键词：双抗夹心ELISA,Nodal,细胞融合,配对抗体,生物素-亲和素

基金资助：国家自然科学基金资助项目（81672943、81472643）