玉米弯孢叶斑病菌clt-1基因生物信息学分析和启动子的功能鉴定

来源：中国生物工程杂志2017年第3期北京时间：

作者：倪璇, 高金欣, 余传金, 刘铜, 李雅乾, 陈捷

单位：1. 上海交通大学农业与生物学院 农业部都市农业(南方)重点开放实验室 上海 200240;2. 上海交通大学 国家微生物代谢重点实验室 上海 200240

摘要：利用农杆菌介导的基因转化（Agrobacterium-mediated transformation，ATMT）技术构建玉米弯孢叶斑病菌突变体库，并从中筛选到了一个毒素合成相关基因clt-1。对clt-1基因编码的蛋白质进行生物信息学分析，结果表明CLT-1的分子质量为81.984 8kDa，等电点pI为8.62，不稳定指数为55.08；CLT-1是亲水性蛋白，包含1个膜外区域。在亚细胞水平上，CLT-1定位于细胞核内；在氨基酸序列方面，CLT-1含有多个苏氨酸、丝氨酸和酪氨酸激酶磷酸化位点；在功能方面，CLT-1包含BTB特征结构域，可能参与一些功能蛋白质活性的调控。利用GFP（green fluorescent protein）基因作为报告基因，构建了用于鉴定clt-1基因启动子活性的pC1300th-Pclt1-GFP真菌表达载体，采用ATMT方法转化弯孢菌萌发的分生孢子，通过PCR及GFP荧光检测clt-1基因启动子在弯孢菌中调控GFP基因表达的活性。结果表明，在共聚焦激光扫描显微镜下观察到菌丝和孢子发绿色荧光，说明弯孢菌clt-1基因启动子具有较强驱动外源gfp基因表达的活性。

关键词：玉米弯孢叶斑病菌,生物信息学,启动子活性,clt-1,GFP

基金资助：国家自然科学基金（31471734），国家玉米产业技术体系（CARS-02）资助项目