杂合β-甘露聚糖酶AuMan5Aloop的H321对其酶学性质的影响

来源：中国生物工程杂志2017年第2期北京时间：

作者：李雪晴, 袁风娇, 程建青, 董运海, 李剑芳, 邬敏辰

单位：1. 江南大学食品学院 无锡 214122;2. 江南大学无锡医学院 无锡 214122

摘要：目的：将loop置换杂合β-甘露聚糖酶AuMan5A的H321突变回野生型酶AuMan5A对应的Gly，以分析杂合酶的酶学性质与H321的相关性。方法：采用大引物PCR技术将AuMan5A基因（Auman5A）编码H321的密码子CAC突变为Gly的GGT，构建突变酶基因Auman5A；借助表达质粒pPICZαA将该突变酶基因在Pichia pastoris GS115中实施表达，并分析重组表达产物AuMan5A的酶学性质。结果：AuMan5A H321G置换前后的最适温度Topt均为75℃，高于AuMan5A的65℃；AuMan5A在70℃的半衰期t1/2为300 min，介于AuMan5A（10 min）和AuMan5A（480 min）之间；AuMan5A比活性分别为AuMan5A和AuMan5A的12.8和1.43倍；催化效率kcat/Km为后两者的14.1和1.12倍。结论：通过H321G置换及对3种酶的温度特性、比活性和催化效率的测定及比较，证实了H321对AuMan5A的酶学性质有一定的影响。

关键词：β-甘露聚糖酶,杂合酶,定点突变,突变酶,酶学性质

基金资助：国家自然科学基金资助项目（31271811）