小鼠c-Myc基因的克隆表达及其纯化

来源：中国生物工程杂志2017年第2期北京时间：

作者：项丽, 王申, 田海山, 钟美娟, 周汝滨, 曹定国, 梁朋, 张国平, 何滔, 庞实锋

单位：1. 广东医科大学 东莞 523808;2. 温州医科大学药学院 温州 325035

摘要：目的：克隆小鼠c-Myc基因，构建原核表达载体并对其进行蛋白表达及纯化。方法：以TetO-FUW-OSKM质粒为模板经PCR扩增c-Myc基因，再通过基因重组技术与pET-3C载体相连转化大肠杆菌DH5α。经抗性筛选，PCR鉴定阳性重组子，测序正确后，重组质粒转化大肠杆菌Rosetta（DE3），IPTG诱导蛋白表达，SDS-PAGE对重组蛋白进行鉴定分析。结果：DNA电泳结果证实PCR扩增产物与预期大小一致，DNA测序结果显示与GenBank公布的c-Myc基因序列一致，IPTG诱导SDS-PAGE电泳后，在分子量64kDa左右出现诱导后蛋白新增条带，与预测的c-Myc分子量大小一致。结论：成功地构建了pET3C-Myc原核表达载体，表达并纯化出了c-Myc蛋白，为今后研究c-Myc蛋白及相关蛋白诱导体细胞成多能干细胞打下基础。

关键词：c-Myc基因,基因克隆,基因表达

基金资助：广东省自然科学基金（2015A030313527）、广东省省级科技计划项目（2013B031800014）、东莞市社会科技发展项目（2013108101062）、浙江省自然科学基金（LY13H080004）资助项目