稳定表达Aβ特异性单链抗体的哺乳动物细胞株构建和功能研究

来源：中国生物工程杂志2017年第2期北京时间：

作者：温杰, 宋琳琳, 张莹, 王荷, 何金生, 洪涛

单位：1. 北京交通大学理学院生命科学与生物工程研究院 北京 100044;2. 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 北京 100052

摘要：构建可以稳定表达Aβ特异性单链抗体（scFv）的哺乳动物细胞株。应用重叠延伸PCR的方法，以前期建立的Aβ特异性单克隆抗体（A8）的轻、重链可变区基因为模板，构建scFv的基因片段，通过（G4S）3或p2A两种不同的连接肽（Linker）序列，拼接得到多种形式的scFv基因片段，用于构建真核表达载体。利用脂质体分别转染人宫颈癌细胞（Hela）和中国仓鼠卵巢细胞（CHO），Western blot鉴定scFv的表达情况；以潮霉素筛选获得稳定表达抗Aβ的scFv细胞株，以间接ELISA和斑点印迹分析所得scFv的抗原识别能力；采用体外细胞实验，在超微病理水平分析所得scFv的细胞保护作用。结果：成功构建了Aβ特异性scFv的3个真核表达载体pSecTag2/HygroA-VL-（G4S）3-VH、pSecTag2/HygroA-VH-（G4S）3-VL和pSecTag2/HygroA-VL-p2A-VH，获得了2株稳定表达Aβ特异性scFv的细胞株Hela-VL-p2A-VH和CHO-VL-（G4S）3-VH。Western blot结果表明了相应scFv的正确表达，间接ELISA和斑点印迹结果表明所分泌的细胞上清具有Aβ抗原识别能力，体外实验显示其具有阻断和抑制Aβ寡聚体细胞毒性的作用。稳定表达Aβ特异性单链抗体的细胞株有助于AD免疫治疗基础研究的进一步开展。

关键词：阿尔茨海默病,β淀粉样肽（A β）,单链抗体

基金资助：国家自然科学基金（81100809，81271417）、北京市自然科学基金（7152090）、中央高校基本科研业务费（2015JBM096）资助项目