以CotC为分子载体在枯草芽孢杆菌表面展示海藻糖合酶

来源：中国生物工程杂志2017年第1期北京时间：

作者：赵一瑾, 王腾飞, 汪俊卿, 王瑞明

单位：1. 齐鲁工业大学生物工程学院 济南 250353;2. 山东省微生物工程重点实验室 济南 250353

摘要：海藻糖是自然界中普遍存在的一种非还原性双糖，是一种极好的天然干燥剂和保鲜剂。海藻糖合酶能够催化α，α-1，4-糖苷键连接的麦芽糖直接转化为α，α-1，1-糖苷键连接的海藻糖，是生产海藻糖的首选。为获得具有良好展示效果的海藻糖合酶，将其高效稳定的展示于枯草芽孢杆菌芽孢表面，实验同时分别选取增强型绿色荧光蛋白（EGFP）和海藻糖合酶（Tres）作为模型蛋白，以来自枯草芽孢杆菌的芽孢衣壳蛋白CotC作为枯草芽杆菌表面展示的锚定蛋白进行表面展示研究。利用流式细胞仪分析EGFP在芽孢表面展示的情况，结果表明芽孢衣壳蛋白CotC可以将EGFP固定在芽孢的表面。然后将荧光蛋白基因egfp通过酶切替换为海藻糖合酶基因tres，将重组菌株使用pH7.5的缓冲液清洗并重悬，与底物浓度为30%的麦芽糖在50℃水浴条件下作用2h，反应产物利用HPLC检测，能够检测到海藻糖峰，通过计算得到的酶活为252U/ml。说明海藻糖合酶基因通过与芽孢衣壳蛋白CotC融合后可被展示在芽孢的表面。

关键词：海藻糖,海藻糖合酶,枯草芽孢杆菌,表面展示,重组表达

基金资助：国家自然科学基金资助项目（31501413）