胆固醇7,8位脱氢酶的表达及催化活性研究

来源：中国生物工程杂志2017年第1期北京时间：

作者：张璟, 张文强, 秦慧民, 毛淑红, 薛家禄, 路福平

单位：1. 天津科技大学生物工程学院 工业发酵微生物教育部重点实验室 天津 300457;2. 河南利伟生物医药股份有限公司 焦作 454800

摘要：果蝇的neverland基因是胆固醇7，8位脱氢的重要酶基因。为了探究其在胆固醇脱氢反应中的催化机制，将neverland分别克隆至表达载体pIEx-6及pXY212，再转染导入S2细胞并电转化到S. cerevisiae W303-1A中表达。Western blot结果证实NVD蛋白在重组S2细胞及S. cerevisiae W303-1A中实现了表达。胆固醇转化实验经HPLC分析发现，重组S2细胞可以将胆固醇转化为7-脱氢胆固醇，而重组S. cerevisiae W303-1A并不能实现胆固醇的7，8位脱氢。此外，在重组S. cerevisiae W303-1A和S2细胞的破碎液共同转化胆固醇及NVD体外转化实验中也未发现产物7-脱氢胆固醇的生成。实验结果显示，neverland基因在S2细胞中具有生物活性而在S. cerevisiae中没有生物活性，表明它在胆固醇脱氢时需要其它的伴侣蛋白协助，实验结果为进一步研究其催化机制提供了理论基础。

关键词：胆固醇7,8位脱氢酶,S2细胞,酿酒酵母W303-1A,生物转化,7-脱氢胆固醇

基金资助：国家“863”计划资助项目（2011AA02A211-06）