一株高效氧化胆固醇的简单节杆菌构建与转化条件优化

来源：中国生物工程杂志2016年第11期北京时间：

作者：张璟, 张玉富, 秦慧民, 毛淑红, 路福平

单位：天津科技大学生物工程学院 工业发酵微生物教育部重点实验室 天津 300457

摘要：为实现胆固醇的高效生物氧化，利用基因工程手段将编码简单节杆菌胆固醇氧化酶的DNA片段克隆到质粒pTY2中，构建pTY2-5332插入表达载体。该载体以简单节杆菌基因组中的16S rDNA位点为整合点，提高了胆固醇氧化酶在基因组中的拷贝数，实现了简单节杆菌胆固醇氧化酶的过表达。重组菌的生长实验分析表明，插入到16S rDNA位点的胆固醇氧化酶没有影响简单节杆菌的生长。重组菌可在20h将2g/L的胆固醇完全转化为4-胆甾烯-3酮，比原始菌的转化时间缩短了4h，提高了胆固醇的转化效率。经过转化条件优化确定了该重组菌以2%的接种量后继续培养16h，然后胆固醇经120目过筛后投料量为2g/L，并添加2%（体积比）二甲基甲酰胺作为促溶剂；胆固醇添加18h后可完全转化为4-胆甾烯-3-酮，是优化前的1.11倍。

关键词：简单节杆菌,胆固醇氧化酶,胆固醇,4-胆甾烯-3-酮,16S rDNA

基金资助：国家高技术研究发展计划资助项目（2011AA02A211-06）