决明胰蛋白酶抑制剂1活性相关残基的定点突变与抑制活性分析

来源：中国生物工程杂志2016年第10期北京时间：

作者：向缅, 朱建全, 俞继华, 李洋洋, 李娟娟, 刘祖碧, 王万军, 廖海, 周嘉裕

单位：西南交通大学生命科学与工程学院 成都 610031

摘要：决明胰蛋白酶抑制剂1（CoTI1）属于Kunitz胰蛋白酶抑制剂家族成员，通过序列比对预测Arg86、Leu84和Thr88等3个氨基酸残基可能是CoTI1发挥抑制作用的关键残基。通过定点突变的方法将Arg86、Leu84与Thr88残基分别突变为Asp残基，并考察各突变体对胰蛋白酶及棉铃虫等鳞翅目害虫消化酶的抑制作用。与CoTI1相比，CoTI1、CoTI1与CoTI1突变体对胰蛋白酶的抑制活性分别下降了93%、64%与59%；对棉铃虫、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾等3种鳞翅目害虫消化酶的平均抑制活性分别下降了88.7%、57%与60.7%。以上结果表明Arg86、Leu84与Thr88是CoTI1发挥抑制作用的关键残基，这为CoTI1的抑制分子机制及抗虫研究提供了重要的理论依据。

关键词：决明,胰蛋白酶抑制剂,定点突变

基金资助：国家自然科学基金（31371232，31500276）、成都市科技技术研发项目（2015-HM01-00051-SF）资助项目