大肠杆菌可溶性表达抗TNF-α Fab的工艺优化

来源：中国生物工程杂志2016年第9期北京时间：

作者：张宇萌, 童梅, 陆小冬, 米月, 莫婷, 刘金毅, 姚文兵

单位：1 中国药科大学生命科学与技术学院 南京 210009;2 北京三元基因药业股份有限公司 北京 102600

摘要：目的：通过构建抗TNF-α Fab重组表达质粒，在大肠杆菌周质空间中高效可溶性表达抗TNF-α Fab，经工艺优化以提高目的蛋白的产率。方法：菌体经发酵罐发酵后，使用萃取方法进行周质空间可溶性目的蛋白的萃取并通过试验设计（DOE）优化萃取工艺，采用Q Sepharose Fast Flow强碱性阴离子交换柱净化，Phenyl Sepharose Fast Flow疏水柱及Protein L亲和柱纯化。结果：经DOE筛选得到了相对最优的萃取条件，该纯化方法得到的目的蛋白的体积产率可达23.5mg/L，纯度大于90%，回收率大于24%，且离子交换柱净化过程有效地保护了亲和柱，提高了亲和柱的使用寿命。抗体亲和力检测证明抗TNF-α Fab具有良好的生物学活性。结论：通过萃取工艺及纯化方法的优化，为抗TNF-α Fab的进一步工艺放大及目的蛋白的性质研究奠定了基础。

关键词：大肠杆菌,TNF-α,Fab,DOE,溶液萃取,疏水作用层析,Protein L

基金资助：北京市科技计划资助项目（Z141100000514008）