一种适用于片段替换/插入突变扫描的克隆方法

来源：中国生物工程杂志2016年第8期北京时间：

作者：甘春杨, 刘亚, 罗英英, 张文露, 黄爱龙, 蔡雪飞, 胡接力

单位：重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室 重庆 400016

摘要：功能序列的改造是基因工程的一项基础技术。序列改造往往涉及较大片段的插入或替换，为了获得更优化的改造序列，这种片段插入或替换经常需要以扫描方式进行。传统的酶切连接方式在这种情况下可能难以实现或者费时费力。建立了一种golden gate方法结合混合克隆和快速鉴定的策略（简称Gmix），利用该策略，成功地将外源基因（Gaussia荧光素酶基因）以4种模式，扫描式插入或替换HBV复制质粒的指定区域。该方法成功率高，操作简便快速且成本较低，适合于其他DNA序列的类似改造工作。

关键词：克隆,基因工程,Golden,gate,片段扫描,方法

基金资助：国家自然科学基金（81471946）、重庆市科委项目（cstc2015jcyjA10023，cstc2012jjA10135）资助项目