Bst DNA聚合酶大片段在全基因组扩增中的应用

来源：中国生物工程杂志2016年第7期北京时间：

作者：张心愿, 邓佳, 刘馨, 陈琳, 林峻, 蔡伟文

单位：1 福州大学应用基因组学研究所 福州 350108;2 福州大学生物科学与工程学院 福州 350108

摘要：Bst DNA聚合酶大片段作为一种常用的DNA聚合酶，因其独特的特点：能引发链置换反应、高保真、耐高温等，而成为一种重要的DNA多重置换扩增酶。目的：为减少成本，设计一种高产，方便且扩增活性高的Bst DNA聚合酶大片段表达体系；探究该酶应用于胃癌石蜡包埋组织基因组DNA的扩增条件。方法：采用pTWIN1质粒作为载体克隆表达Bst DNA聚合酶大片段，应用几丁质亲和层析柱纯化该酶，使用该酶对人类基因组DNA进行不同温度下扩增，探究其最适反应温度，并据此对胃癌石蜡包埋组织基因组DNA进行扩增。结果：由此得到的Bst DNA聚合酶大片段能运用于胃癌石蜡包埋组织基因组DNA的扩增，扩增效率可达200倍，并能应用于aCGH芯片。结论：扩增得到保真性高，覆盖基因组范围大的DNA扩增产物。该应用与aCGH结合，使得对少量的癌症石蜡包埋组织DNA样本进行全基因组扩增，并进行其基因拷贝数变异研究成为可能。

关键词：Bst,DNA聚合酶大片段,多重置换扩增,石蜡包埋组织,全基因组扩增

基金资助：国家自然科学基金（31371287，31301537，31571300），福建省科技重大专项（2013YZ0002-1，2013YZ0002-2）资助项目