CRISPR/Cas9编辑绒山羊FGF5基因细胞株的建立

来源：中国生物工程杂志2016年第7期北京时间：

作者：阿力玛, 高原, 苏小虎, 周欢敏

单位：内蒙古农业大学生命科学学院 内蒙古自治区生物制造重点实验室 呼和浩特 010018

摘要：拟利用CRISPR/Cas9技术建立编辑FGF5基因的绒山羊细胞株。在FGF5基因的第一外显子设计靶点并合成gRNA靶点引物，构建2个编辑FGF5基因的Cas/gRNA真核表达质粒载体。电穿孔法转染绒山羊成纤维细胞后T7核酸内切酶（T7E1）检测载体活性，选择活性最高的载体转染细胞，单细胞接种并扩繁，提取基因组DNA，PCR及测序鉴定。经测序分析共获得20个FGF5基因敲除细胞株（包括FGF5和FGF5），总突变率为14.81%。双敲除突变细胞株可作为供体细胞进行重构胚构建，为创造高产绒性状的FGF5基因编辑绒山羊奠定基础。

关键词：绒山羊,FGF5,CRISPR/Cas9,基因编辑

基金资助：“转基因生物新品种培育”国家科技重大专项资助项目（2014ZX08008-002）