EV71多表位抗原亲和纯化及类病毒颗粒胞外自组装

来源：中国生物工程杂志2016年第7期北京时间：

作者：薛玲, 刘江宁, 张耀, 张纯, 王祺, 秦川, 刘永东, 苏志国

单位：1 中国科学院过程工程研究所 生化工程国家重点实验室 北京 100190;2 中国科学院大学 北京 100049;3 中国医学科学院实验动物研究所 北京 100021

摘要：利用肠道病毒71型（EV71）衣壳蛋白优势表位肽段构建融合蛋白抗原能有效抑制病毒感染，有望成为继灭活病毒后更为安全有效的疫苗品种。该融合蛋白能通过原核体系有效表达但形成无序包涵体，采用常规层析介质难以实现目标蛋白与宿主杂质的有效分离，阻碍了对该抗原蛋白进行全面临床前活性及安全性评价。在原有融合蛋白抗原N端插入组氨酸标签，对形成的包涵体变性溶解后直接采用镍金属螯合亲和介质进行分离纯化，获得了纯度大于95%的抗原纯品，目标蛋白收率46.8%。采用透析方式脱除纯化样品中高浓度脲，发现直接透析至无脲的缓冲液中蛋白质大量沉淀，而先稀释至2mol/L脲的缓冲液中然后用G25脱盐柱完全脱除脲则无任何沉淀形成，获得近100%的蛋白质收率。透射电镜分析最终样品发现融合蛋白形成了10nm左右粒径均一的类病毒蛋白颗粒，且在pH 8.0的磷酸盐缓冲液中保持稳定。该研究结果为将EV71融合蛋白抗原发展为安全有效且低成本的手足口疫苗奠定了基础。

关键词：肠道病毒71型,手足口病疫苗,多表位融合抗原,亲和层析,复性及自组装

基金资助：国家自然科学基金（21576267），北京市自然科学基金（2162041），“重大新药创制”国家科技重大专项（2012ZX09101319004，2016ZX09101120-006）资助项目