基于CDR2和CDR3区随机突变筛选抗黄曲霉毒素B1单域重链抗体的研究

来源：中国生物工程杂志2016年第7期北京时间：

作者：庞倩, 马榆, 李诚, 刘韫滔, 刘书亮, 王小红, 刘爱平

单位：1 四川农业大学食品学院 雅安 625014;2 华中农业大学食品科学技术学院 武汉 430070

摘要：基于抗原-抗体特异性反应的免疫学方法是黄曲霉毒素B1的常用检测方法。为制备针对AFB1的抗体，综合参考已报道的噬菌体文库筛选的抗AFB1单域重链抗体（variable domain of heavy chain of heavy chain antibody,VHH）序列，合成一条经密码子优化[适于大肠杆菌（Escherichia coli，E. coli）表达]的高同源性序列。在抗AFB1 VHH的CDR2和CDR3区引入部分随机突变，构建噬菌体抗体库。采用phage-ELISA技术，以AFB1O-OVA为包被抗原，淘选单域重链抗体库，经过4轮筛选，获得15株能与AFB1特异性结合的阳性克隆。以结合力最高的1株克隆为材料，扩增相应的VHH基因，构建表达质粒pET-22b-VHH。在E. coli BL21（DE3）中表达VHH，经间接竞争ELISA分析，获得的抗AFB1 VHH的灵敏度约为10μg/mL。

关键词：黄曲霉毒素B1,单域重链抗体,Phage-ELISA,随机突变