PCSK6对可溶性corin的活化作用研究

来源：中国生物工程杂志2016年第7期北京时间：

作者：李枫, 周田甜, 刘萌, 董宁征

单位：1 苏州大学附属第一医院 苏州 215006;2 江苏省血液研究所 卫生部血栓与止血重点实验室 苏州 215006;3 苏州大学唐仲英血液学研究中心 苏州 215123

摘要：目的：研究前蛋白转化酶枯草溶菌素6（proprotein convertase subtilisin/kextin type 6,PCSK6）对可溶性corin的活化作用，以及PCSK6作用后的可溶性corin是否具有生物学活性。方法：以野生型corin质粒为模板，通过PCR扩增出不含跨膜区的corin基因片段，并将目的基因克隆至真核表达载体pSEC得到重组质粒pSECsolCorin，测序验证。分别将可溶性corin、PCSK6及心钠肽前体（pro-atrial natriuretic peptide,pro-ANP）的表达载体转染人胚胎肾（human embryonic kidney,HEK）293细胞，收取上清液。然后将可溶性corin上清液与不同体积的PCSK6上清液共同孵育，免疫印迹（Western blot）方法检测corin蛋白的活化情况。再将PCSK6作用后的可溶性corin与pro-ANP上清液共孵育，检测可溶性corin的生物学活性。结果：构建了可溶性corin的表达质粒，并在HEK293细胞成功表达可溶性corin蛋白。可溶性corin的上清液与pcsk6上清液共同孵育后可检测到活化条带，并可使pro-ANP活化为ANP。结论：PCSK6同样可以剪切活化可溶性corin蛋白，活化后的corin具有生物学活性。为可溶性corin用于心衰的临床治疗提供了重要基础。

关键词：可溶性corin,PCSK6,pro-ANP,心力衰竭

基金资助：教育部科学技术研究项目（213016A），国家自然科学基金（81570457）资助项目