人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白在CHO细胞中的表达

来源：中国生物工程杂志2016年第7期北京时间：

作者：李成媛, 张晶晶, 钱凯, 缪亚娜, 蔡燕飞, 杨剑峰, 何杨, 金坚

单位：1 江南大学药学院 无锡 214122;2 温州大学生命与环境科学学院 温州 325035;3 苏州大学唐仲英血液学研究中心 苏州 215123;4 苏州大学附属第一医院 苏州 215006

摘要：干扰素α2b（interferonα2b,IFNα2b）是一种用于病毒性疾病和肿瘤性疾病治疗的多功能细胞因子，因其在体内的半衰期短限制了其在临床上的应用。将IFNα2b连接到人血清白蛋白（human serum albumin,HSA）的C端，构建融合蛋白HSA-IFNα2b。构建含融合蛋白的真核表达质粒pMH3/HSA-IFNa2b，经电转的方法转入中国仓鼠卵巢（Chinese hamster ovary,CHO）细胞中。经G418抗性压力筛选和目的蛋白的表达量筛选，最终获得一株高表达的稳定细胞株（CHO/pMH3/HSA-IFNa2b）。表达的目的蛋白经Western blot验证显示，产物具有IFNα2b和HSA的双抗原性。经悬浮驯化稳定后，通过批次筛选得到一株稳定的高克隆表达株，产量约为65mg/L，进一步选取高表达克隆株在悬浮驯化中不同代数进行批次培养，不同代数之间蛋白质的表达量和生长情况没有明显的差异，获得一株稳定遗传表达的单克隆细胞株，3L摇瓶的流加培养结果显示，最佳发酵时间为15天，蛋白质表达量为121mg/L。经离心获得的发酵液，经两步纯化后获得蛋白质纯度高达96.8%的目的蛋白，总回收率为22.3%。参照《中国药典》2015版对IFNα2b的检测方法，结果显示，CHO表达的HSA-IFNα2b比活性为4.16×10IU/mg。首次将HSA-IFNα2b在哺乳动物细胞CHO中构建表达，表达获得高活性的HSA-IFNα2b融合蛋白。

关键词：人血清白蛋白,干扰素α2b,中国仓鼠卵巢细胞

基金资助：“重大新药创制”国家科技重大专项（2013ZX09102033），国家“863”计划（2014AA021003，2015AA020802），国家自然科学基金（81273437）资助项目