Cas9蛋白对亲骨转移人乳腺癌细胞株生物学性质和超微结构的影响

来源：中国生物工程杂志2016年第7期北京时间：

作者：宋丽杰, 王丽, 杨传红, 赖晃文, 王捷

单位：1 华南理工大学生物科学与工程学院 广州 510006;2 广州军区广州总医院 广州 510010

摘要：目的：构建表达Cas9蛋白的亲骨转移人乳腺癌细胞株，并研究Cas9蛋白的表达对细胞生物学性质和超微结构的影响，为利用CRISPR/Cas9技术研究乳腺癌骨转移分子机制提供实验基础。方法：通过慢病毒载体介导Cas9蛋白基因转染亲骨转移人乳腺癌细胞株MDA-MB-231BO，通过G418筛选转染细胞，采用流式细胞术、Western blot、免疫细胞化学验证Cas9基因转染是否成功；运用实时无标记动态细胞分析技术和细胞划痕实验检测Cas9蛋白表达对细胞增殖及迁移的影响；透射电镜观察Cas9蛋白表达对细胞超微结构的影响。结果：成功构建稳定表达Cas9蛋白的亲骨转移人乳腺癌细胞株MDA-MB-231BO-Cas9，Cas9蛋白的表达对细胞的增殖、迁移和超微结构无明显影响。结论：MDA-MB-231BO-Cas9细胞可用于CRISPR/Cas9技术进一步研究。

关键词：Cas9蛋白,亲骨转移人乳腺癌细胞,实时无标记动态细胞分析,透射电镜

基金资助：国家青年自然科学基金（81402409），广东省自然科学基金（2015A03031313605）资助项目