化脓性链球菌溶血素O活性结构重组蛋白的制备

来源：中国生物工程杂志2016年第6期北京时间：

作者：杨思源, 潘敬梅, 王硕, 邓开轩, 邓强, 黄新河, 李学如

单位：西南交通大学生命科学与工程学院 成都 610031

摘要：生物信息分析化脓性链球菌溶血素O(streptolysin O,Slo)蛋白结构表明,Slo蛋白除含有由461氨基酸残基组成的溶血活性结构域Thiol_cytolysin外,在N端还有一跨膜结构域。利用pET101-GENE蛋白表达系统,成功构建出表达具有Slo活性重组蛋白的重组子,采用镍柱亲和层析分离技术,纯化目的蛋白;纯化蛋白SDS-PAGE检测分析表明,重组蛋白与预测的溶血活性结构域的分子量相一致;溶血实验显示,纯化重组蛋白具有溶血活性。以纯化的重组蛋白为免疫原,对大鼠进行4次免疫,所获得免疫血清经 Elisa检测,抗Slo血清效价达到 1 ∶12 800;Western blot检测猪链球菌、马链球菌和化脓性链球菌中的链球菌溶血素结果显示,抗Slo多克隆抗体仅能与化脓性链球菌溶血素O发生反应,表明研究制备的化脓性链球菌溶血素O活性结构重组蛋白抗原具有较好的特异性,所制备的抗原Slo 可用于进一步开发抗链球菌溶血素O(ASO)试剂盒。

关键词：化脓性链球菌,链球菌溶血素O重组蛋白,多克隆抗体

基金资助：国家自然科学基金(31070117)、四川省科技支撑项目(2012FZ0048)、国家大学生创新性实验计划项目(201510613062)资助项目