抗人AFP单链抗体与藻胆蛋白融合蛋白的构建、表达与活性分析

来源：中国生物工程杂志2016年第5期北京时间：

作者：陈华新, 武静, 赵瑾, 姜鹏

单位：1. 中国科学院海洋研究所 实验海洋生物学重点实验室 青岛 266071;2. 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋生物学与生物技术功能实验室 青岛 266071;3. 中国科学院大学 北京 100049

摘要：目的:构建多基因表达载体,在大肠杆菌中同时表达AFP单链抗体(scFv)和蓝藻别藻蓝蛋白α亚基脱辅基蛋白(apcA)组成的融合蛋白(scFv-apcA)、藻胆蛋白裂合酶(cpcS)及藻红蛋白生物合成酶(Ho1和pebS),获得共价结合藻红胆素的融合蛋白(scFv-apcA-PEB)。方法:利用融合PCR将scFv和apcA基因连接起来,形成scFv-apcA融合基因,并将该融合基因与cpcS克隆到表达载体pCDFDuet-1中;将Ho1和pebS基因克隆到表达载体pRSFDuet-1中。将两种载体共转化到大肠杆菌中,IPTG诱导重组蛋白表达,经亲和层析获得重组蛋白,通过光谱学分析和抗体竞争性抑制法,测定重组蛋白的生物学活性。结果:成功表达融合蛋白scFv-apcA-PEB,分子质量约为45kDa,与理论值相符,其最大吸收峰为549.5nm,最大荧光发射峰为560nm,竞争抑制ELISA法初步鉴定活性,竞争抑制率达到48%。结论:利用大肠杆菌表达系统,获得了同时具有荧光特性和免疫学活性的重组蛋白。

关键词：甲胎蛋白,单链抗体,别藻蓝蛋白,融合蛋白

基金资助：国家863计划(2014AA093505,2014AA093501),国家海洋公益性行业科研专项经费项目(201205027-2),国家自然科学基金(41276164)资助项目