抗黄曲霉毒素B1单链抗体在Sf9昆虫细胞中的表达与性质分析

来源：中国生物工程杂志2016年第5期北京时间：

作者：刘爱平, 李诚, 刘书亮, 王小红, 陈福生

单位：1. 四川农业大学食品学院 雅安 625014;2. 华中农业大学食品学院 武汉 430070

摘要：目的:在原核表达抗黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)单链抗体(single chain Fv fragment,scFv)研究的基础上,为进一步了解和提高抗AFB1 scFv的活性,利用Sf9昆虫细胞表达抗AFB1 scFv,并对其活性进行探索研究。方法:构建pFastBac 1-scFv2E6VHVL重组质粒,将重组质粒转化Escherichia coli (E. coli) DH10Bac细胞,进行蓝白斑筛选,挑取阳性克隆。提取相应的重组杆状病毒穿梭载体Bacmid侵染Sf9昆虫细胞,表达scFv,利用镍亲和层析法纯化scFv,并以ELISA检测scFv活性。结果:蓝白斑筛选后,经菌落PCR和测序验证挑取的白斑阳性单克隆含有正确的单链抗体基因。提取相应的重组杆状病毒穿梭载体Bacmid侵染Sf9昆虫细胞,通过Western blot检测得知抗AFB1 scFv在Sf9昆虫细胞中成功表达。AFB1对scFv的抑制中浓度(IC50)为30μg/ml。结论:与E. coli BL21(DE3)表达系统相比,scFv灵敏度转好,但仍有较大提升空间。

关键词：AFB1,ELISA,Sf9细胞,scFv

基金资助：国家自然科学基金(31271876),中央高校基本科研业务费专项资金(52209-814012)资助项目