N-糖基化对TNFR-Fc融合蛋白结构稳定性和生物活性的影响

来源：中国生物工程杂志2016年第5期北京时间：

作者：黄嘉慧, 汪才坤, 覃锦红, 陈龙冠, 黄云娜, 谢秋玲

单位：暨南大学生命科学技术学院 广东省生物工程药物重点实验室 基因工程药物国家工程研究中心 广州 510632

摘要：目的:探究糖基化对TNFR-Fc融合蛋白结构、稳定性和生物活性的影响。方法:经N-糖酰胺酶F(PNGase F)切除TNFR-Fc融合蛋白所连的糖链,用SEC-HPLC、傅里叶变换红外光谱法和荧光光谱法等方法分析N-糖基化和去糖基化后重组蛋白的结构变化,通过加速稳定性实验和毛细管电泳检测对比其酶切前后稳定性变化,其生物活性的差异经细胞杀伤实验进行比较。结果:去糖基化后TNFR-Fc融合蛋白质分子质量略有降低,其构象、荷电性质及生物活性没有明显差异;然而切除N-糖链,TNFR-Fc二聚体的稳定性降低,蛋白质降解物明显增加。结论:去N-糖基化对TNFR-Fc的构象、荷电性质和生物活性的影响并不显著,但会影响TNFR-Fc融合蛋白的稳定性。

关键词：TNFR-Fc,糖基化,去糖基化,蛋白质构象

基金资助：国家十二五重大新药创制项目(2012ZX09202-301-001),广东省战略性新兴产业核心技术攻关项目(2012A080800008),广东省重大科技专项(2012A080202014)资助项目