转铁蛋白-PEG-睫状神经营养因子的制备及其生物活性评价

来源：中国生物工程杂志2016年第4期北京时间：

作者：殷爽, 冯翠, 张纯, 王祺, 王健, 余蓉, 刘永东, 苏志国

单位：1. 四川大学华西药学院 靶向药物及释药系统教育部重点实验室 成都 610041;2. 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室 北京 100190;3. 北京生物制品研究所 北京 100024

摘要：为了实现在体内更持久的药效作用,根据睫状神经营养因子CNTF第17位为游离半胱氨酸残基,而转铁蛋白Tf无游离半胱氨酸的特点,采用N-羟基琥珀酰亚胺-聚乙二醇5K-马来酰亚胺(NHS-PEG5k-MAL)作为偶联剂,实现了两者定点偶联,然后结合蛋白自身特性制定纯化方法,制备获得纯度高于90%的转铁蛋白-聚乙二醇5k-睫状神经营养因子(Tf-PEG5k-CNTF)耦合物。高效凝胶色谱和动态光散射分析显示耦合物的表观分子体积大于两蛋白之和。细胞试验结果显示耦合物的活性下降至原蛋白的65.8%。大鼠药代动力学试验显示Tf-PEG5k-CNTF耦合物在体内的代谢半衰期延长至8.2小时,与CNTF原蛋白相比提高了约17倍。小鼠动物试验显示在每周2次的给药频率,每次1.0 mg/kg的剂量下,Tf-PEG5k-CNTF能更为显著地影响小鼠对食物摄入量和减轻体重。因此,转铁蛋白偶联技术可用于脑部靶向蛋白药物的长效递送。

关键词：蛋白偶联,长效,转铁蛋白,睫状神经营养因子,减肥

基金资助：教育部博士点基金(120120181110036)、国家自然科学基金(21576267)资助项目