D194G突变对meso-2,3-丁二醇脱氢酶催化特性的影响

来源：中国生物工程杂志2016年第1期北京时间：

作者：郝文博, 姬芳玲, 王静云, 张悦, 王天琪, 车文实, 包永明

单位：1. 大连理工大学生命科学与技术学院 大连 116024;2. 黑河学院物理化学系 黑河 164300

摘要：目的:比较来源于Enterobacter aerogenes CICC10293和Bacillus subtilis的meso-2,3-丁二醇脱氢酶(E. a-BDH和D194G B. s-BDH)活性和动力学参数,分析D194氨基酸对BDH催化特性的影响。方法:利用E. coli BL21(DE3)原核表达E. a-BDH和D194G B. s-BDH,经HiTrap Q FF阴离子交换柱和Superdex 75凝胶柱纯化后,用MALDI-TOF MS确定其分子质量;检测NADH/NAD氧化还原的吸光度变化确定BDH活性、辅酶和底物的特异性、最适pH、温度及动力学参数。结果:重组表达E. a-BDH和D194G B. s-BDH是同源四聚体蛋白,基因序列有两处碱基不同(g.27A/T和g.581A/G),其中g.581A/G导致BDH的一处氨基酸发生改变(p.D194G)。D194G B. s-BDH的活性约为E. a-BDH的2.3%,并且丧失了氧化meso-2,3-丁二醇的能力。二者均以乙偶姻/NADH为最适底物,但D194G B. s-BDH的Km是E. a-BDH的5.63倍。结论:D194G氨基酸突变降低了BDH的活性。

关键词：meso-2,3-丁二醇脱氢酶,枯草芽孢杆菌,乙偶姻

基金资助：黑龙江省青年科学基金资助项目(QC2012C009)