利用不同碳源进行毕赤酵母高密度发酵及TEF-1启动子指导下的HPV16_L1蛋白表达

来源：中国生物工程杂志2015年第10期北京时间：

作者：夏烨, 黄惟巍, 杨旭, 孙鹏艳, 姚月婷, 王世杰, 刘存宝, 孙文佳, 白红妹, 姚宇峰, 马雁冰

单位：1. 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所 昆明 650118;2. 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室 昆明 650118;3. 云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心 昆明 650118

摘要：目的:研究不同碳源对于毕赤酵母菌株在发酵罐中高密度生长,以及对组成型翻译延伸因子-1(TEF-1)启动子指导下HPV16_L1蛋白表达的影响。 方法:利用1.5L发酵罐使用不同碳源进行毕赤酵母的高密度发酵,检测在不同碳源利用情况下菌体的增殖动力学,并以Western blot 动态分析HPV16_L1蛋白的表达水平。 结果:以甘油作为碳源,菌体细胞湿重可达到510g/L(OD600为189.4),HPV16_L1的表达在72h之前保持高水平;在甲醇和葡萄糖中菌体细胞湿重都可达到220g/L左右(OD600分别为75.3和77.3),甲醇利用下HPV L1蛋白在144h后仍保持较高水平表达,葡萄糖中60h HPV L1表达开始显著下降;在山梨醇作为碳源情况下菌体未能在发酵罐中获得高密度生长;总体上,甘油作为碳源在72h左右可获得最高的目的蛋白收获总量。 结论:为实现毕赤酵母高密度生长与异源基因在TEF-1启动子指导下高效表达,以及HPV L1蛋白的简易、有效制备提供了基础。

关键词：TEF-1启动子,碳源,毕赤酵母,高密度发酵,HPV L1蛋白

基金资助：云南省应用基础研究面上研究项目(2013FZ137,2010ZC232)、中央高校基本科研业务费(2012N08)资助项目