构建皮肤组织中特异表达HPV16-E6基因的小鼠模型

来源：中国生物工程杂志2015年第10期北京时间：

作者：汤俊明, 赵彦平, 刘奇, 盛青松, 吴黎明, 乔国洪

单位：1. 宜兴市人民医院 宜兴 214200;2. 无锡市申瑞生物制品有限公司 无锡 214200

摘要：目的:构建特异在皮肤表达乳头瘤病毒(HPV16) E6 基因的真核表达载体,并鉴定其在转基因小鼠体内的表达。方法:通过PCR方法扩增皮肤特异启动子pINV及 HPV16-E6 ,将以上片段通过酶切连接,插入去掉CMV启动子的pcDNA3.1(－)载体,获得dpcDNA3.1(－)-pINV-E6载体;并显微注射制备其转基因小鼠,利用RT-PCR、Western blot及免疫组化技术检测获得的阳性小鼠体内E6的表达水平。结果:dpcDNA3.1(－)-pINV-E6载体测序正确;经鉴定31只实验小鼠中,有2只小鼠携带外源基因,将其与野生型小鼠交配获得的F1代中又有2只阳性小鼠;且在获得阳性小鼠的皮肤组织中RT-PCR检测有E6的转录本,Western blot 检测有E6蛋白表达,且免疫组化检测结果显示有E6在皮肤表达且引起皮肤微增生。结论:成功构建了pINV-E6转基因模型小鼠, HPV16-E6 基因在小鼠皮肤中特异表达,为进一步研究HPV16-E6在癌症中的作用奠定了基础。

关键词：乳头瘤病毒(HPV),转基因小鼠,E6 基因,特异表达

基金资助：江苏省自然基金资助项目(BK2012564)