黄病毒检测工程细胞系的构建及功能鉴定

来源：中国生物工程杂志2015年第9期北京时间：

作者：尉研, 王焕琴, 吴萌, 张凤娟, 梁国栋, 朱武洋

单位：中国疾病预防控制中心病毒病所 北京 100052

摘要：目的:构建黄病毒检测工程细胞系并对其功能进行鉴定.方法:以含有登革4型病毒814669株全长感染性克隆的质粒P4质粒为基础,缺失prM-E基因1 945bp,构建含有红色荧光蛋白mCherry报告基因的登革病毒复制子载体P4-△prME-mCherry.以P4-△prME-mCherry为基础,通过融合PCR方法,以真核表达载体pCDNA3.1+为骨架,构建用于黄病毒检测细胞筛选的缺陷型真核表达质粒pCDNA3.1-P4-mCherry.脂质体转染法将质粒pCDNA3.1-P4-mCherry转染BHK-21细胞,G418进行筛选,获得的阳性细胞克隆经96孔板系列稀释筛选、纯化克隆细胞BHK-Flavivirus.结果:BHK-Flavivirus细胞感染登革病毒60h后,能够在荧光显微镜下检测到红色荧光蛋白mCherry的表达,说明BHK-Flavivirus能够用于外源黄病毒的检测.BHK-Flavivirus细胞分别感染黄病毒属的乙脑病毒(P3)、4型登革病毒(P4),可以检测到红色荧光;而辛德毕斯病毒(XJ-160)、和基孔肯雅病毒(SD08Pan)、盖塔病毒(HB0234)等正链RNA病毒感染后则不出现红色荧光.结论:以上结果表明BHK-Alphavirus细胞可用于未知蚊媒黄病毒检测,该方法通过报告基因表达与否,能够高效、特异的甄别主要蚊媒甲病毒和黄病毒,同时该方法有利于稀缺病毒的分离、保存,操作方法简单、直观,有望应用于临床检测及病毒性生物战剂的早期甄别.

关键词：黄病毒,细胞系,红色荧光蛋白

基金资助：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治科技重大专项资助项目(2013ZX10004-101,2014ZX10004002-004-001,2013ZX10004-601-001)