MG-132提高TNFR-Fc融合蛋白在CHO细胞中表达的研究

来源：中国生物工程杂志2015年第9期北京时间：

作者：温家明, 聂艳峰, 梁翰章, 黄雯茜, 雷云, 谢秋玲, 裴运林, 熊盛

单位：1 暨南大学药学院 生物医药研究院&基因药物国家工程中心 广州 510632;2 广东丸美生物科技股份有限公司 广州 510530

摘要：目的:在不影响细胞活力的前提下,通过抑制人肿瘤坏死因子受体-Fc(TNFR-Fc)融合蛋白的降解,提高其在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的产量和质量. 方法:通过在细胞培养过程中加入全蛋白质合成抑制剂Cycloheximide、溶酶体抑制剂Leupeptin、蛋白酶体抑制剂MG-132,验证TNFR-Fc融合蛋白在CHO细胞的降解途径;免疫印迹(Western blot)方法检测在细胞内TNFR-Fc融合蛋白的变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测分泌表达的TNFR-Fc融合蛋白的含量.Protein A亲和层析纯化细胞培养液上清,高效液相色谱(HPLC)检测重组蛋白的纯度,并通过阻断肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的L929细胞毒作用来检测纯化的TNFR-Fc蛋白的活性.结果:TNFR-Fc在CHO细胞内,经泛素蛋白酶体途径降解,稳定表达TNFR-Fc的CHO细胞培养过程中添加50μmol/L MG-132,可以使TNFR-Fc融合蛋白的分泌表达量提高42.35%,纯化后,二聚体比例提高28.60%,并且纯化后目的蛋白的比活性也增加.结论:在不影响细胞活力、蛋白质生物学活性的前提下,添加蛋白酶体抑制剂MG-132提高TNFR-Fc融合蛋白在CHO细胞中的表达量,为进一步研究从抑制蛋白质降解途径来提高重组蛋白在CHO细胞中的表达量提供了现实依据.

关键词：MG-132,TNFR-Fc降解,CHO细胞,泛素化,提高表达

基金资助：国家重大新药创制科技重大专项(2012ZX09103301-033,2012ZX09202301-001),广东省战略性新兴产业核心技术攻关项目(2012A080800008),广东省重大科技专项(2012A080202014)资助项目