产耐高温谷氨酰胺转胺酶菌株的快速筛选方法

来源：中国生物工程杂志2015年第8期北京时间：

作者：郭玮婷, 张慧, 查东风, 黄汉峰, 黄静, 高红亮, 常忠义, 金明飞, 鲁伟

单位：1. 华东师范大学生命科学学院 上海 200241;2. 河南省商丘市农业局经作中心 商丘 476000;3. 泰兴市东圣食品科技有限公司 泰兴 225411

摘要：目的:采用亚硝基胍(NTG)诱变结合96孔板高通量筛选方法筛选产耐高温谷氨酰胺转胺酶(MTG)的茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)。方法:通过优化96孔板高通量测定MTG活性的方法、确定筛选温度和时间,建立了产耐高温MTG菌株的快速筛选方法;通过优化NTG诱变条件建立了筛选突变库;通过96孔板高通量初筛、摇瓶复筛获得了产耐高温MTG的突变株12-82,并通过摇瓶发酵对12-82所产MTG进行热稳定性分析。结果:采用2mg/ml NTG、pH8.0、60min的诱变条件获得突变株,将突变株的发酵上清液于70℃水浴7.5min,再在37℃空气浴、反应10min的条件下测定MTG活性,从5 200株突变株中筛选出5株产耐高温MTG的突变株,其中突变株12-82在50℃水浴60min以及70℃水浴1.5min的酶活残留率均比出发株高出近20%,且80℃保温2min仍有11.9%的酶活残留率。结论:利用NTG诱变结合96孔板高通量筛选的方法筛选到5株所产MTG热稳定性相对较高的突变株,其中突变株12-82在50℃、70℃和80℃的酶活残留率均有10%~20%的提高。这为高温食品加工领域所需耐高温MTG生产菌株的高效筛选提供了可行性方案。

关键词：茂原链霉菌,谷氨酰胺转胺酶,热稳定性,NTG诱变,96孔板高通量筛选

基金资助：中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(78210203)