人源类溶菌酶蛋白6在毕赤酵母中的重组表达及活性分析

来源：中国生物工程杂志2015年第8期北京时间：

作者：黄鹏, 李文姝, 谢君, 鲍建瑛, 曹晓娥, 余龙, 徐一新

单位：1. 上海健康医学院基础医学院 上海 200237;2. 上海健康医学院药学院 上海 200237;3. 上海纽约大学文理学部 上海 200122;4 复旦大学遗传工程国家重点实验室 上海 200433

摘要：利用毕赤酵母(Pichia pastoris)重组表达人源类溶菌酶蛋白6(human lysozyme-like protein 6,hLyzl6),对其酶学性质进行分析。根据毕赤酵母密码子偏爱性设计并人工合成hLyzl6基因,将其连接至含有乙醇氧化酶启动子(AOX1)的pPIC9K质粒构建重组表达载体pPIC9K-hlyzl6;重组表达载体经线性化后电转化入毕赤酵母GS115感受态细胞,经G418筛选获得高拷贝重组菌株后进行甲醇诱导表达。经甲醇诱导72 h后发酵液上清中酶活性达到最高值,发酵液上清经SDS-PAGE检测在14.8 kDa处有重组hLyzl6蛋白条带,分子量符合预期,通过甲壳素亲和层析可对其进行纯化;采用比浊法测定hLyzl6酶学活性,结果表明hLyzl6对溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)有较好的杀灭作用,最适反应温度为40℃,最适pH为5.5,其酶活力为54 700U/mg,Cu对其活性有明显抑制,EC50为30.2799 mg/L。采用基因工程方法首次在毕赤酵母GS115成功表达了重组hLyzl6,证实其在体外具有杀菌活性,初步揭示hLyzl6在男性生殖系统先天性免疫中发挥了一定作用,为进一步研究hLyzl6的功能和应用开发奠定了基础。

关键词：人源类溶菌酶蛋白6,毕赤酵母,表达,杀菌活性

基金资助：上海市自然科学基金(15ZR1421800)、上海市高校青年教师资助培养计划(PF-JZ-QT02022016)资助项目