地衣芽孢杆菌原生质体电转化方法的研究

来源：中国生物工程杂志2015年第7期北京时间：

作者：温赛, 杨建国

单位：1. 北京工商大学食品学院 食品风味化学北京市重点实验室 食品添加剂与配料北京高校工程研究中心 北京 100048;2. 北京化工大学生命科学与技术学院 北京 100029

摘要：为了解决地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)工业菌株难以转化的问题,将原生质体制备、电穿孔和原生质体再生技术相结合,建立了一种地衣芽孢杆菌原生质体电击转化方法。在对菌体生长状态、溶菌酶作用时间、电转电压、渗透压保护剂等条件进行优化后,试验了将不同类型的表达载体,即游离型质粒pGJ103(3.3kb)和整合型质粒pAX01(9.3kb),分别转入两株地衣芽孢杆菌工业生产菌株B. licheniformis CICC 10181和B. licheniformis CICC 20204中。实验结果显示,对数生长期后期的菌体酶解40min后制备的地衣芽孢杆菌原生质体得率为96%,再生率达25%以上。原生质体与质粒DNA在最适电压0.6kV/mm下电击转化,并以0.5mol/L山梨醇或甘露醇作为渗透压保护剂进行再生培养后,最终游离型质粒的转化率可达0.88×10~1.1×10 CFU/μg pGJ103,整合型质粒的转化率达到0.45×10~0.52×10CFU/μg pAX01。该方法为地衣芽孢杆菌野生工业菌株的遗传改造提供了一种新的、高效的转化手段。

关键词：地衣芽孢杆菌,原生质体,电转化

基金资助：国家自然科学基金资助项目(21406005)