2型猪链球菌MocR家族转录调控因子SSU0562基因敲除突变体的构建及毒力分析

来源：中国生物工程杂志2015年第7期北京时间：

作者：李娟, 刘丽娜, 胡丹, 朱旭辉, 龚秀芳, 赵琳, 钟璟皓, 潘秀珍, 王长军

单位：1. 南京军区军事医学研究所 南京 210002;2. 贵阳医学院生物与工程学院 贵阳 550004

摘要：目的:构建2型猪链球菌强毒株05ZYH33中MocR家族转录调控因子 SSU0562基因敲除的突变株,探索SSU0562 基因缺失对细菌基本生物学特性和毒力的影响。方法:构建左右两侧为 SSU0562 基因上下游的同源序列,中间部分为壮观霉素抗性基因(Spc)的基因敲除质粒,通过同源重组的方法筛选 SSU0562 基因敲除突变株Δ0562。对突变株与野生株的基本生物学特性进行系统的比较分析,并且将小鼠作为动物感染的模型来研究突变株的毒力。结果:组合PCR的分析及基因测序结果均表明Spc完全取代了S. suis2中 SSU0562 基因位点,表明基因敲除突变体Δ0562构建成功,反转录PCR(RT-PCR)证实了突变株Δ0562中 SSU0562 基因在转录水平的缺失;在溶血活性、生长速率及对小鼠的致病力方面,突变株Δ0562与野生株05ZYH33相比均无显著差别,然而革兰染色实验显示突变株Δ0562的成链能力明显减弱。结论:猪链球菌强毒株05ZYH33的毒力并未因 SSU0562 基因的缺失而发生显著性改变,表明 SSU0562 基因并非猪链球菌的毒力决定因子,但很有可能参与猪链球菌成链能力的调控。

关键词：2型猪链球菌,MocR,SSU0562,基因敲除毒力

基金资助：国家自然科学基金(81471920,31170124,81172794),南京军区医学创新课题(ZX39),江苏省自然科学青年基金(BK20140096)资助项目