鸭疫里默氏杆菌RecA作为一种内参蛋白的评价

来源：中国生物工程杂志2015年第6期北京时间：

作者：廖何斌, 刘马峰, 程安春

单位：1. 四川农业大学预防兽医研究所 成都 611130;2. 四川农业大学动物医学院禽病防治中心 雅安 625014;3. 四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室 成都 611130

摘要：由于缺少适合的内参蛋白,所以用Western blot的方法来研究鸭疫里默氏杆菌蛋白表达的调节尚未见报道。以鸭疫里默氏杆菌基因组为模板,PCR扩增含有组氨酸标签His-tag的recA基因和截段的recAP基因,并分别将其克隆于原核表达载体pET32a。将重组质粒转化到表达菌Rosetta中,经1mmol/L的IPTG诱导进行蛋白质表达。用组氨酸标签亲和试剂镍-琼脂糖进行重组蛋白质的纯化。用纯化的重组蛋白对4周龄的昆明鼠进行免疫,制备多克隆抗体。Western blot实验表明,截段表达的RecAP的多克隆抗体血清比全长RecA蛋白的多克隆抗体血清与鸭疫里默氏杆菌总蛋白反应更特异;在铁离子限制性环境和血红素丰富环境中培养的鸭疫里默氏杆菌的RecA蛋白表达量一致。因此,鸭疫里默氏杆菌的RecA蛋白可以在铁离子和血红素代谢等研究中作为Western blot的内参蛋白。

关键词：鸭疫里默氏杆菌,内参蛋白,RecA蛋白,多克隆抗体,蛋白免疫印迹

基金资助：国家自然科学基金(31302131)、高等学校博士学科点专项科研基金(20135103120006)、中国博士后基金(2014M552378) 资助项目