乙酰化修饰调控结核杆菌异柠檬酸裂合酶的研究

来源：中国生物工程杂志2015年第6期北京时间：

作者：李瑶瑶, 毕静, 王艺红, 秦云贺, 张雪莲

单位：复旦大学 生命科学学院 遗传工程国家重点实验室 上海 200433

摘要：目的:探索结核杆菌异柠檬酸裂合酶(ICL)蛋白322位点赖氨酸(Lys322)的乙酰化修饰对蛋白功能的调控作用。方法:构建结核杆菌ICL蛋白原核表达载体pET28a-icl,并对Lys322位点进行定点突变为精氨酸(Arg,R)和谷氨酰胺(Glu,Q),体外表达纯化获得重组蛋白ICL、ICL和ICL。通过Western blotting和酶活性测定来揭示Lys322位点突变前后对蛋白的乙酰化修饰水平及蛋白功能的影响。结果:Western blotting检测发现大肠杆菌表达体系获得的ICL、ICL和ICL蛋白均有较高水平的蛋白赖氨酸乙酰化修饰信号,较ICL,ICL和ICL突变蛋白的酶活性分别下降了大约50%和70%。结论:在大肠杆菌的表达体系中,ICL蛋白可以获得乙酰化修饰。ICL突变蛋白酶活性的显著下降,揭示Lys322位点乙酰化修饰对ICL蛋白的功能存在负向调控。为未来深入探索赖氨酸乙酰化修饰对结核杆菌代谢,潜伏感染的调控作用奠定了基础。

关键词：异柠檬酸裂合酶,乙酰化修饰,定点突变

基金资助：国家自然科学基金资助项目(81261120558、30901828)