增强型肿瘤特异性启动子介导CDTK治疗肝癌的体内外研究

来源：中国生物工程杂志2015年第6期北京时间：

作者：薛金锋, 薛志刚, 陈毅瑶, 李卓, 尹彪, 邬玲仟, 梁德生

单位：中南大学医学遗传学国家重点实验室 长沙 410078

摘要：目的:探讨运用增强子上调肿瘤特异性启动子hTERT转录活性后,调控自杀融合基因CDTK对人肝癌细胞系Bel-7402的体内外杀伤作用。方法:将CMV增强子、hTERT启动子及CDTK自杀融合基因克隆入核糖体基因区打靶载体pHrn,构建pHr-CeTpCDTK-GFP 治疗载体并转染Bel-7402细胞,经RT-PCR、HPLC、MTT检测CDTK基因的表达和对肝癌细胞的体外杀伤效果。再将Bel-7402细胞接种到裸鼠皮下致瘤,以肿瘤杀伤载体pHr-CeTpCDTK-GFP进行瘤内转染并检测其抑瘤效果,此外将转染后的细胞接种致瘤,检测其成瘤时间及肿瘤生长曲线等,从两方面检测其体内杀伤效果。结果:成功构建了肿瘤特异性治疗载体,体外转染肝癌细胞后,经RT-PCR、HPLC证明CDTK基因能在肝癌中表达,且治疗载体在体外对肝癌细胞有明显毒性。动物实验结果发现裸鼠致瘤后治疗组血清中5-Fu浓度为7.694μg/ml,治疗组肿瘤体积与对照组相比减小6.5倍。而细胞转染治疗载体后致瘤,治疗组成瘤时间比对照组晚8天,且治疗组裸鼠的平均生存期较对照组延长16天。结论:pHr-CeTpCDTK-GFP载体能在体内外高效靶向杀伤肝癌细胞,为肝癌基因治疗提供了一种新的途径。

关键词：CDTK基因,核糖体基因区载体,肝癌,基因治疗

基金资助：国家自然科学基金资助项目(30500302)