新型人血清白蛋白特异结合肽ML的筛选及鉴定

来源：中国生物工程杂志2015年第5期北京时间：

作者：马义, 赵绍军, 洪岸

单位：暨南大学细胞生物学系 暨南大学生物医药研究院 广东省生物工程药物重点实验室 基因工程药物国家工程研究中心 广州 510632

摘要：利用噬菌体展示技术筛选和鉴定新型人血清白蛋白(HSA)特异结合7肽,分析与垂体腺苷酸环化酶激活肽27(PACAP27)构成的融合多肽 ML-PACAP27与HSA的亲和结合力,以确定筛选的7肽 (ML1 和 ML2)在与其他药物多肽或蛋白融合状态下仍具有较高的HSA结合活力。利用噬菌体展示7肽库,经四轮筛选、筛选克隆的DNA测序、酶联免疫吸附技术分析(ELISA)初步鉴定筛选克隆与HSA的亲和作用,并利用等离子共振技术(SPR)定量测定合成的ML-PACAP27融合多肽与人血清白蛋白的亲和力常数。实验结果表明:经筛选获得2个与人血清白蛋白特异性结合的7肽序列,其氨基酸序列分别为:ML1:LKSCKPL和ML2:SLKSHAL; ELISA分析结果显示,含有ML1和ML2的噬菌体均可亲和结合HSA,而且ML2的亲和结合作用高于ML1;SPR分析结果显示,ML1-PACAP27和ML2-PACAP27与HSA的解离常数(KD)分别为:8.1×10mol/L和 3.7×10mol/L,ML1-PACAP27与HSA的结合力高于ML1-PACAP27。 筛选和鉴定了两个可与HSA特异性结合的7肽序列,该7肽序列可用于特异偶联HSA的长效分子药物的重组融合表达或设计,可为延长分子药物的半衰期及新型药物研发提供新工具。

关键词：人血清白蛋白,噬菌体展示,特异性结合,药物半衰期

基金资助：国家自然科学基金面上项目(81373314),广东省自然科学基金(S2012010008756),高等学校博士学科点专项科研基金(20124401120012),广东省教育部产学研结合项目(2010B090400544, 2013B090500105)资助项目