利用GAP启动子在毕赤酵母中表达与纯化GLP-1类似物

来源：中国生物工程杂志2015年第5期北京时间：

作者：钱凯, 张晶晶, 吴素平, 蔡燕飞, 陈蕴, 金坚

单位：1. 江南大学生物工程学院 无锡 214122;2. 江南大学药学院 无锡 214122

摘要：胰高血糖素样肽-1(GLP-1)能提高II型糖尿病患者β胰腺细胞的胰岛素分泌量并能促进β胰腺细胞增殖,是潜在的糖尿病治疗药物。设计一种GLP-1类似物AGGH,即GLP-1(A2G)的二联体与人血清白蛋白(HSA)的N端连接,并在融合蛋白GGH前添加一个丙氨酸(A)。PCR获得融合基因aggh,将融合基因连接到pGAPZαA质粒中。在酵母中利用甘油醛三磷酸脱氢酶(GAP)启动子组成型表达外源蛋白AGGH。研究结果显示:筛选获得表达重组菌株,基因组PCR和western-blot验证正确;以葡萄糖为最优碳源培养下,表达量达到68 mg/L;5 L发酵罐中,发酵52 h蛋白产量最高达238 mg/L。蛋白经四步纯化后,获得纯度为95.8%的AGGH融合蛋白。与利用醇氧化酶1(AOX1)启动子表达的AGGH比较,发现两者产量和活性没有明显差异。但是,GAP启动子表达获得AGGH融合蛋白更加方便,且发酵时间减少了27.8%(20 h)。

关键词：毕赤酵母,GLP-1类似物,GAP启动子

基金资助：国家863计划(2014AA021003)、中科院先导计划(XDA01040202)资助项目