原位染色检测慢病毒载体转录通读方法的建立

来源：中国生物工程杂志2015年第5期北京时间：

作者：高越, 檀硕, 任兆瑞, 张敬之

单位：1. 上海交通大学附属儿童医院 上海市儿童医院 上海交通大学医学遗传研究所 上海 200040;2. 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室 上海 200040;3. 生物治疗协同创新中心 四川大学 华西医院 成都 610041

摘要：慢病毒载体作为基因导入系统已被多次应用于基因治疗试验当中,近年来受到了广泛关注。转录通读是慢病毒载体应用过程中存在的潜在不安全因素之一。为了进一步完善慢病毒载体转录通读的检测方法,使检测结果更加直观准确,在已建立的在转录水平检测其转录通读的基础上,进一步模拟病毒载体整合入基因组的状态,于原病毒载体3'-LTR 后插入经密码子优化的LacZ报告基因。经转染细胞后进行原位染色,发生通读现象的细胞会被染成蓝色,从而在蛋白质水平直观地体现慢病毒载体的通读情况,说明所建立的方法是准确可行的。所得结论与qRT-PCR方法在转录水平检测的结果是平行相一致。原位染色检测法的建立为慢病毒载体转录通读的检测、提高慢病毒载体生物安全性的研究提供了技术支持。

关键词：慢病毒载体,转录通读,原位染色,原病毒载体

基金资助：国家自然科学基金资助项目(81271690)