PEG定点修饰重组人睫状神经营养因子及其生物活性评价

来源：中国生物工程杂志2015年第5期北京时间：

作者：冯翠, 王祺, 张纯, 秦培勇, 郑秀玉, 王健, 刘永东, 苏志国

单位：1. 北京化工大学生命科学与技术学院 北京 100029;2. 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室 北京 100190;3. 北京生物制品研究所有限责任公司 北京 100024

摘要：采用分子质量为40kDa的马来酰亚胺聚乙二醇(mPEG-MAL),对重组人睫状神经营养因子突变体CNTF-C的第17位半胱氨酸巯基进行定点修饰,通过离子交换层析获得单修饰产物Mono-PEG-CNTF-C,并对其结构及体内外活性进行评价。实验结果表明,在pH 7.5的Tris-HCl缓冲液体中,蛋白质与修饰剂的为1:3,4℃下反应12h,修饰率可达到90%以上,修饰混合物通过一步阴离子交换层析可获得纯度98%以上的单修饰产物。荧光光谱(FL)及圆二色(CD)图谱显示Mono-PEG-CNTF-C与原蛋白二、三级结构一致。TF-1.CN5a.1细胞增殖活性检测表明,Mono-PEG-CNTF-C的比活达到了6.51×10 IU/mg,体内循环半衰期相对原蛋白显著提高了30.3倍。该研究可为开发CNTF长效产品提供基础。

关键词：马来酰亚胺聚乙二醇,CNTF-C12单修饰物,重组人睫状神经营养因子,分离纯化