EGFP-Luc-Hepa1-6细胞系的构建及其在小鼠肝癌模型中的应用

来源：中国生物工程杂志2015年第5期北京时间：

作者：叶雨辰, 赵俊龙, 王琳, 段娟丽, 高春辰, 秦鸿雁, 窦科峰

单位：1. 第四军医大学西京医院 西安 710032;2. 第四军医大学基础部医学遗传学与发育生物学教研室 肿瘤生物学国家重点实验室 西安 710032

摘要：目的: 构建带有增强型绿色荧光蛋白EGFP及荧光素酶luciferase的真核表达载体pCMV-Luciferase-IRES2-EGFP,对肝癌细胞系Hepa1-6转染后进行稳定筛选,并将表达该载体的细胞系应用于小鼠原位肝癌模型构建,以对小鼠肝癌细胞进行稳定标记与活体示踪。 方法: 对pGL3-Basic质粒进行Xba I酶切、Klenow片段补平黏端、Xho I酶切获得luciferase小片段,与Xho I/Sma I 酶切pIRES2-EGFP质粒获得的载体大片段连接,获得重组质粒pCMV-Luciferase-IRES2-EGFP。酶切鉴定、测序比对确认序列完全正确后,以重组载体转染Hepa1-6细胞进行稳定筛选,以荧光显微镜观察EGFP表达,报告基因实验与LuminaⅡ成像系统检测荧光素酶活性。确认该细胞系中的质粒得到表达后,以该细胞系进行C57BL/6小鼠肝脏原位接种构建肝癌模型,以LuminaⅡ成像系统连续活体监测肝癌的生长,取离体的肝癌组织制备石蜡切片(HE染色)和冰冻切片(免疫荧光染色)分别观察离体肿瘤组织病理学特征及其中肝癌细胞绿色荧光蛋白表达情况。结果: 成功构建表达pCMV-Luciferase-IRES2-EGFP载体的Hepa1-6细胞系(EGFP-Luc-Hepa1-6),并以该细胞系成功构建C57BL/6小鼠原位肝癌模型,实现小鼠肝癌细胞的活体示踪与体外标记。 结论:成功构建EGFP-Luc-Hepa1-6细胞系,且以此细胞系构建的小鼠原位肝癌模型可以同时实现小鼠肝癌生长的连续活体监测与离体组织检测。

关键词：肝癌,Hepa1-6,EGFP,Luciferase,小鼠,载体

基金资助：国家自然科学基金重大研究计划培育项目(91029731),国家自然科学基金青年科学基金(81100307),国家自然科学基金青年科学基金(81401940),肿瘤生物学国家重点实验室(第四军医大学)开放基金(Cbskl201408)资助项目