Taqman多重实时荧光定量PCR检测裸鼠肿瘤转移模型中肿瘤转移率方法的建立

来源：中国生物工程杂志2015年第4期北京时间：

作者：张宇, 白豆, 朱乃硕

单位：复旦大学 生命科学学院遗传工程国家重点实验室 生物医学研究院 微生物与分子免疫学研究室 上海 200438

摘要：目的:建立基于多重荧光定量PCR技术的动物体内恶性肿瘤转移模型中肿瘤转移率高效检测的方法。方法:以人和小鼠的β2m基因为目标,设计相应的引物和Taqman探针;分别抽提人涎腺腺样囊性癌ACC细胞和小鼠Sp2/0细胞的基因组DNA作为模板,建立两物种双重荧光定量PCR检测方法,且分别以人和鼠定量基因检测为参照考察双重荧光定量PCR方法的特异性、灵敏性和精确性,并与传统转移灶称重计算肿瘤转移率的方法进行比较。结果:双重Taqman实时荧光定量PCR检测方法具有很好的特异性和较高的灵敏度(0.006ng/μl DNA), 重复性较好(批间平均CV=0.036), 有较强稳定性,比传统称重法更高效,更准确。结论:双重荧光定量PCR能够在同一反应体系下同时对动物组织中人肿瘤转移灶和周围组织进行快速准确的定量检测,计算出肿瘤转移率, 具有经济、快速、特异性强等优点,在肿瘤动物模型肿瘤转移率检测方面具有很高的应用价值。

关键词：多重荧光定量PCR,肿瘤转移率,涎腺腺样囊性癌

基金资助：国家科技重大专项(2012ZX10002006-002-003)、国家自然科学基金(30571650, 31370927)、国家863生物医药高技术课题(2011AA02A114)、上海市科委科学基金(13431900602)资助项目