菠菜SoHb基因的原核表达及功能分析

来源：中国生物工程杂志2015年第4期北京时间：

作者：郭兆来, 白学贵, 严金平, 陈宣钦, 李昆志, 徐慧妮

单位：昆明理工大学 生命科学与技术学院 昆明 650500

摘要：为了进一步揭示菠菜非共生血红蛋白(SoHb)的功能,通过RT-PCR的方法从菠菜根中克隆了SoHb基因编码区全长序列,并将其克隆到原核表达载体pET32a上,构建原核表达载体pET32a-SoHb,并转化大肠杆菌BL21 star(DE3)获得原核表达工程菌株。通过IPTG法诱导该重组质粒在大肠杆菌中得到高效表达,融合蛋白分子质量约为38 kDa,且在上清液和包涵体中均有表达,可溶性部分经Ni NTA亲和柱纯化,获得纯化的融合蛋白。与空载体相比,重组菌对硝化胁迫的抗性增加。以纯化的融合蛋白为抗原免疫昆明小鼠,制备多克隆抗体,并对其进行了Western blot检测。实验结果为进一步研究菠菜SoHb基因功能奠定了基础。

关键词：非共生血红蛋白,大肠杆菌表达,硝化胁迫

基金资助：国家自然科学基金(31101557;31460526)、云南省应用基础研究面上项目(2010ZC053)、云南省教育厅科学研究基金(2011Z109)资助项目