Construction of HPD Promoter Reporter Vector and Analysis of Its Transcriptional Activity

来源：中国生物工程杂志2015年第4期北京时间：

作者：满善晴; 孔祥祯; 董小明; 陈慧; 詹轶群; 李长燕; 杨晓明

摘要：HPD是一种酪氨酸分解代谢途径中的关键酶，特异表达于肝脏。目前对HPD的研究主要集中在HPD与酪氨酸血症等疾病的关系上，而对其转录调控的报道较少，并且对HPD在肝脏中特异性表达的转录调控机制尚不清楚，也未见报道。通过构建HPD基因启动子荧光素酶报告基因载体, 检测其在肝源细胞中的特异转录活性，进而揭示其肝脏特异性表达的调控机制。方法: 运用UCSC在线数据库分析人HPD基因组结构，并获得其5′端上游启动子区域－2000～+39bp的DNA序列。以人的肝癌细胞HepG2基因组DNA为模板,利用PCR扩增该序列，并克隆到pGL3 Basic荧光素酶报告基因载体上。通过设计不同引物，进一步构建系列缺失体，共获得7个不同长度的荧光素酶报告基因载体。将构建的载体分别转染HepG2、L02及HEK293细胞，通过双荧光素酶活性分析实验检测不同缺失体的转录活性。结果： 报告基因实验结果显示－600～－400区域在肝源细胞系HepG2和L02细胞中具有较强转录活性，而在HEK293细胞中活性较低，－400~+39区段则在两种细胞中均有转录活性。生物信息学分析结果显示－600～－400区域内存在较多肝脏特异性转录因子结合位点。结论: 成功构建了HPD基因启动子荧光素酶报告基因载体, 发现－600～－400存在调控HPD肝脏特异表达的关键元件，为进一步深入揭示HPD肝脏特异性表达的转录调控机制奠定了理论基础。

关键词：HPD基因/启动子/肝脏特异表达/转录活性分析

基金资助：国家自然科学基金（81472586），国家“973”计划（2011CB915501）资助项目