基因重组TNFα衍生物TRSP10的高效制备及其对DU145细胞抑制作用研究

来源：中国生物工程杂志2015年第4期北京时间：

作者：方世雄, 马义, 沈淑桃, 赵绍军, 洪岸

单位：暨南大学细胞生物学系 暨南大学生物医药研究院 广东省生物工程药物重点实验室 基因工程药物国家工程研究中心 广州 510632

摘要：利用基因工程技术表达能够促使肿瘤细胞DU145凋亡的肿瘤坏死因子α(TNFα)的衍生物TRSP10,并在体外研究其对DU145细胞的抑制效应。以重叠延伸PCR方法合成TRSP10基因序列,并插入高效表达的质粒载体pKYB-MCS的NdeⅠ和SapⅠ酶切位点之间,优化融合蛋白诱导表达的条件,建立了从载体构建到重组菌表达、制备的工艺技术条件。MTT法检测TRSP10对前列腺癌细胞DU145增殖的抑制作用。实验结果表明:重组菌ER2566诱导表达可溶性融合蛋白的最佳条件是诱导剂IPTG浓度为0.8 mmol/L、诱导表达温度37℃、诱导表达时间8h。利用IMPACT系统及HPLC技术纯化制备TRSP10,得到产物纯度达到96%,质谱鉴定确定其分子质量为3.59kDa,与理论值相符;体外细胞学研究结果表明,TRSP10对前列腺癌细胞DU145有明显的抑制作用,在5,10,20,40μmol/L TRSP10及10μmol/L TNFα阳性对照处理后48h抑制率分别达到11.40%,22.97%,33.26%,48.35%及42.50%。

关键词：基因工程,肿瘤坏死因子α衍生物,表达纯化,抑制增殖

基金资助：国家自然科学基金面上项目(81373314)、广东省自然科学基金(S2012010008756)、高等学校博士学科点专项科研基金项目(20124401120012)、中央高校基本科研业务费专项资金(21612408)、科技部科技型中小企业技术创新基金(11C26214413218)、广东省高等学校科技创新项目(2012KJCX0015)、广东省教育部产学研结合项目(2010B090400544,2013B090500105)、广州市科技计划项目(2011J4300112)资助项目